换一批牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB-GITRL真核共表达载体的构建及免疫原性研究
Construction of eukaryotic co-expression vector of Porphyromonas gingivalis outer membrane protein ragB and glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand (GITRL) and its immunogenic analysis
摘要目的:构建牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB和小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体( mGITRL)真核共表达载体,在体内研究其免疫原性.方法:应用PCR扩增技术,从pMD18-T-ragB中获得ragB基因编码序列片段,克隆至真核共表达载体pIRES及pIRES-mGITRL.对重组质粒进行双酶切与测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot检测其在COS7细胞中的表达.将成功构建的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测免疫后小鼠血清中抗RagB的水平.结果:PCR扩增目的基因,酶切和测序证实重组质粒pIRES-ragB及pIRES-ragB-mGITRL成功构建,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞及骨骼肌细胞中均过表达.小鼠血清中检测出高滴度的抗RagB的抗体.结论:pIRES-ragB-mGITRL表达载体的构建,为牙龈卟啉菌疫苗研究、预防和牙周炎治疗提供了实验依据.
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