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小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表达及活性鉴定

Cloning, prokaryotic expression, and antigenicity identification of extracellular domain of mouse CD40

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摘要目的构建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对mCD40/GST融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法从小鼠DC2.4细胞系中扩增目的基因mCD40并克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-6P-1-mCD40,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达mCD40/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其抗原活性.结果 PCR扩增产物经测序分析与GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致；重组表达载体经酶切鉴定正确；IPTG诱导后经SDS-PAGE分析证实得到了相对分子质量(Mr)为45 000的重组蛋白；Western blot法和ELISA检测证实纯化的mCD40/GST蛋白能够与特异性抗体发生反应.结论成功构建了原核表达载体pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表达系统实现了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表达并证明其具有较高的抗原活性.

作者田仁礼 ^[1] 朱静潆 ^[2] 殷小涛 ^[1] 王伟 ^[1] 林晓亮 ^[3] 徐元基 ^[3] 阎瑾琦 ^[3] 张巍 ^[3] 高江平 ^[4] 学术成果认领

作者单位解放军总医院泌尿外科,北京100853;军事医学科学院基础医学研究所,北京100850 ^[1] 解放军总医院泌尿外科,北京100853;新疆大学生命科学与技术学院,新疆乌鲁木齐830046 ^[2] 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850 ^[3] 解放军总医院泌尿外科,北京,100853 ^[4]

关键词 CD40 原核表达蛋白纯化活性检测 CD40 prokaryotic expression protein purification antigenicity identification

医学主题词蛋白(Egg White)小鼠(Mice)基因(Genes)抗原(Antigens)目的(Goals)

分类号 R392.11（医学免疫学）R446.61（诊断学）R392-33（医学免疫学）

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发布时间 2013-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）