换一批人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测
Prokaryotic expression, purification and activity detection of the extracellular and intracellular domains of human IGF1R beta subunit
摘要目的 构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1 R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1R β-PKD融合蛋白,并检测其活性.方法 用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1R β-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体.重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,最后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用.结果 构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate 菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1R β-PKD可以和MEMO相互作用.结论 成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1R β-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白.
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关键词
胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域β亚基胞内蛋白激酶结构域原核表达纯化表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)insulin-like growth factor 1 receptor (IGF1 R)β subunit extracellular domain (β-ED)β subunit intracellular protein kinase domain (β-PKD)prokaryotic expressionpurificationmediator of ERBB2-driven cell motility (MEMO)
医学主题词
蛋白(Egg White)胞间信号肽类和蛋白质类(Intercellular Signaling Peptides and Proteins)受体, 表皮生长因子(Receptor, Epidermal Growth Factor)细胞运动(Cell Movement)生长调节素类(Somatomedins)
栏目名称
发布时间
2015-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81472589）
国家自然科学基金（31100604）
北京市科技新星计划（Z141102001814055）
军事医科院创新基金转化医学项目（ZHYX003）
北京市自然科学基金（7132155）
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