换一批
换一批脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体的构建及其应用
Construction and application of eukaryotic expression vector of fragile X mental retardation 1 (FMR1) gene
摘要目的 构建人脆性X精神发育迟缓基因1(FMR1)真核表达载体,建立稳定转染FMR1的HeLa细胞系.方法 采用PCR扩增出人FMR1的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入pEGFP-N2真核表达载体中,并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定.用脂质体将验证的重组质粒转染至HeLa细胞,通过G418筛选建立FMR1稳定转染的HeLa细胞系.进一步运用Western blot法、免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术鉴定FMR蛋白(FMRP)在HeLa细胞中的表达及定位.结果 双酶切和DNA测序结果表明pEGFP-N2-FMR1真核表达质粒构建成功.Western blot和激光共聚焦显微镜结果显示GFP-FMRP融合蛋白在HeLa细胞中成功表达且主要定位在细胞质.结论 成功建立FMR1稳定转染的HeLa细胞系并可以表达FMRP.
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