过表达miR-519d-3p通过降低DU-145前列腺癌细胞TRAF4水平抑制其增殖

Overexpression of miR-519d-3p inhibits the proliferation of DU-145 prostate cancer cells by reducing TRAF4

摘要目的观察微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)对前列腺癌细胞增殖的影响,并探讨可能的分子机制.方法通过荧光实时定量PCR检测PC-3、DU-145、22RV1、PC-3M、LNCaP人前列腺癌细胞和RWPE-I人正常前列腺上皮细胞中miR-519d-3p的表达水平.以miR-519d-3p表达水平最低的DU-145前列腺癌细胞为转染对象,转染miR-519d-3p模拟物或阴性对照微小RNA (miR-NC)并验证转染效率.采用流式细胞术检测miR-519d-3p对前列腺癌细胞细胞周期的影响,MIT法检测前列腺癌细胞的增殖能力.生物信息学软件预测并应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p的靶基因.荧光实时定量PCR检测miR-519d-3p靶基因的表达水平,Western blot法检测靶基因蛋白及下游转化生长因子β(TGF-β3)信号通路蛋白表达水平.结果与正常前列腺上皮细胞相比,miR-519d-3p在前列腺癌细胞的表达水平显著降低,DU-145细胞表达水平最低.DU-145细胞转染miR-519d-3p模拟物后,细胞miR-519d-3p的表达水平显著增加.过表达miR-519d-3p将前列腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期并降低细胞的增殖能力.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因证明肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)为miR-519d-3p的靶基因.过表达miR-519d-3p可明显降低前列腺癌细胞中TRAF4基因及下游TGF-β信号通路蛋白的表达水平.结论 miR-519d-3p在前列腺癌细胞中低表达,过表达rniR-519d-3p通过抑制TRAF4的表达抑制DU-145前列腺癌细胞的增殖.