换一批CYP2A13/MRP2双表达Flp-InTM CHO细胞系的建立
Establishment of Flp-InTM CHO cell lines with double expression of CYP2A13 and MRP2
摘要目的 构建稳定表达细胞色素 P450家族 2亚家族A成员 13(CYP2A13)和多药耐药相关蛋白 2(MRP2)的双转染Flp-InTM CHO细胞系.方法 分别构建 pCMV6-NEO-CYP2A13和 pcDNA5-MRP2重组质粒.先将 pCMV6-NEO-CYP2A13重组质粒转染至 Flp-InTM CHO细胞中,通过有限稀释法和 4-甲基亚硝胺-1-3-呲啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒性实验筛选CYP2A13活性较高的 CYP2A13-Flp-InTMCHO细胞.再将pcDNA5-MRP2转染至CYP2A13-Flp-InTMCHO细胞中.用实时定量 P眈CR 、Western blot法和 NNK细胞毒性实验,检测双转染细胞及正常细胞中 CYP2AI3 和 MRP2的表达量及其活性,筛选稳定表达 CYP2A13 和 MRP2的 Flp_InTMCHO细胞.结果 相较于未转染细胞,CYP2AI3-Flp-InTMCHO细胞的CYP2A13表达增加,NNK毒性敏感度增加;CYP2A13/MRP2-Flp-InTM CHO细胞的 CYP2A13 和 MRP2表达也明显增加.和 CYP2AI3-Flp-InTM CHO细胞相比,CYP2A13/MRP2-Flp-InTM CHO细胞的 CYP2A13表达量无明显差异,MRP2表达增加,NNK毒性敏感度明显降低.结论 成功建立了 CYP2A13 和 MR凹的双转染细胞模型,为呼吸道致癌物质原位激活研究奠定了基础.
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主题词
细胞(Cells)转染(Transfection)细胞系(Cell Line)多药耐药相关蛋白质类(Multidrug Resistance-Associated Proteins)质粒(Plasmids)
栏目名称
发布时间
2020-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81603189）；
贵州省科技计划项目（黔科合基础[2019]1280号）；
贵州省科学技术厅人才团队项目（黔科合平台人才[2016]5613·677）；
中央引导地方科技专项项目（黔科中引地[2018]4006）
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