自发性狼疮肾炎模型小鼠肾小球系膜细胞的原代培养和鉴定

Primary culture and identification of glomerular mesangial cells from mice with spontaneous lupus nephritis

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摘要目的原代培养及鉴定自发性狼疮肾炎模型小鼠肾小球系膜细胞,探索分离、培养的最佳条件.方法对照组ICR小鼠和模型组MRL/lpr自发性狼疮肾炎小鼠各9只,在12、14和18周龄时,ELISA检测小鼠的自身抗体,二辛可宁酸(BCA)法检测尿蛋白;HE染色和Masson染色观察小鼠狼疮肾炎病变情况.采用细胞筛网分离出肾小球,结合优生选择法原代培养肾小球系膜细胞.通过细胞形态学、免疫细胞化学染色检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、足细胞裂隙素(nephrin)表达鉴定MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞.结果模型组小鼠抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(dsDNA)抗体明显增高,尿蛋白在14和18周龄明显增高;MRL/lpr小鼠从12周开始,肾组织即表现出狼疮肾炎相关的病理改变.接种肾小球系膜细胞25 d后,MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞逐渐铺满培养瓶底,相差显微镜下呈星形、梭形.免疫细胞化学显示α-SMA阳性、nephrin阴性,排除其他肾小球固有细胞.结论建立了自发性狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞的原代培养方法并进行了鉴定.