T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR-T细胞功能鉴定中的应用

Application of TARP luciferase reporter system in function identification of CAR-T cells

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摘要目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR-T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案.方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒.慢病毒包装并感染人原代T淋巴细胞,流式细胞术检测慢病毒感染T细胞的阳性率.通过萤光素酶报告基因系统、Western blot法、流式细胞术、小动物活体成像技术鉴定CAR-T细胞的功能.结果酶切鉴定和质粒测序结果表明重组质粒的顺利构建,流式细胞术结果显示CAR-T细胞的正常制备,萤光素酶活力检测结果表明本系统能够动态响应CAR-T细胞的激活,体外功能实验证实本系统能够反映CAR-T细胞的耗竭状态,小动物活体成像结果体现了本系统在小鼠体内的示踪功能.结论 TARP纳米萤光素酶报告基因系统为评估CAR-T细胞活化水平,耗竭状态以及体内示踪等方面提供了更加便捷、灵敏、定量分析的技术手段.

作者 梁思辛 ^[1] 郑瑞 ^[2] 赵晓娟 ^[2] 张仪婷 ^[2] 王鹏举 ^[2] 蒙若彤 ^[3] 阎博 ^[2] 杨安钢 ^[4] 学术成果认领

作者单位 新乡医学院医学技术学院,河南新乡453003;空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032 ^[1] 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,陕西西安710032 ^[2] 延安大学生命科学学院,陕西延安716000 ^[3] 空军军医大学基础医学院免疫学教研室,陕西西安710032 ^[4]

关键词 T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告基因系统嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T cells)T cell activity-responsive promoter(TARP)luciferase reporter gene system chimeric antigen receptor modified T cells(CAR-T cells)

分类号 R457.2 R730.51 R392.12

栏目名称 基础研究

发布时间 2023-07-28

基金项目

国家自然科学基金 国家肿瘤生物学重点实验室自主课题