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FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响

Impact of tyrosine phosphorylation site mutation in FUNDC1 protein on mitophagy in H9c2 cardiomyocytes

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摘要目的本研究采用定点突变的方法构建FUN14域蛋白1(FUNDC1)Y11和Y18酪氨酸位点突变质粒,探究FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响.方法将使用全基因合成方法构建的突变质粒转染大鼠心肌H9c2细胞,实验分成空质粒组、FUNDC1过表达组、突变Y11组、突变Y18组和突变Y11联合Y18组五组.利用CCK-8法检测H9c2细胞活力;利用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)检测线粒体膜电位;采用Western blot法检测细胞FUNDC1、线粒体转运孔蛋白20(TOM20)、内膜蛋白细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型(COX Ⅳ)的蛋白表达水平;利用共聚焦显微镜确定转染效率以及线粒体、溶酶体共定位的情况.结果成功构建FUNDC1过表达、Y11、Y18、Y11联合Y18位点突变质粒;质粒转染细胞后共聚焦显微镜观察可见GFP荧光广泛表达.与空质粒组相比,FUNDC1过表达、Y11、Y18、Y11联合Y18组FUNDC1蛋白表达水平明显上升,细胞活力及线粒体膜电位无明显变化.与空质粒组相比,转染Y18、Y11联合18突变质粒的细胞TOM20、COX Ⅳ的表达水平上升,线粒体溶酶体共定位减少.结论转染FUNDC1 Y18或Y11联合Y18突变质粒,抑制心肌H9c2细胞的线粒体自噬.

作者张朝阳 ^[1] 于艳丽 ^[2] 武杰芸 ^[1] 田炜 ^[3] 徐菁蔓 ^[4] 学术成果认领

作者单位华北理工大学公共卫生学院,河北唐山 063210 ^[1] 唐山市妇幼保健院,河北唐山 063000 ^[2] 河北省器官纤维化重点实验室,河北唐山 063210;华北理工大学实验动物中心,河北唐山 063210 ^[3] 华北理工大学公共卫生学院,河北唐山 063210;河北省器官纤维化重点实验室,河北唐山 063210 ^[4]

关键词线粒体自噬基因定点突变 FUNDC1 H9c2细胞 mitophagy gene site-directed mutation FUNDC1 H9c2 cell

分类号 R392（医学免疫学）R363（病理学）R392.12（医学免疫学）

栏目名称

基础研究

DOI 10.13423/j.cnki.cjcmi.010027

发布时间 2025-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

中央引导地方科技发展资金项目（226Z7711G）华北理工大学公共卫生学院青年人才托举计划（QNRC202301）