换一批基于血管紧张素转换酶2/血管紧张素(1-7)/Mas通路探究宣肺达郁汤含药血清对脂多糖诱导的急性肺损伤A549细胞的影响
Effects of Xuanfei Dayu Decoction-containing serum on lipopolysaccharide-induced acute lung injury A549 cells based on angiotensin converting enzyme 2/angiotensin(1-7)/Mas pathway
摘要目的 探究宣肺达郁汤含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤A549细胞的影响及其作用机制.方法 将培养的人肺泡上皮细胞A549分为对照(Control)组、模型(LPS)组、宣肺达郁汤含药血清低剂量(XFDYL+LPS)组、中剂量(XFDYM+LPS)组、高剂量(XFDYH+LPS)组、地塞米松(DEX+LPS)组.其中Control组细胞不做干预,其余各组建立急性肺损伤炎症模型;Blank组、LPS组采用空白血清干预,其余各组采用相应含药血清干预.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞增殖情况;采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]的含量;采用试剂盒检测氧化指标[谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)]的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)、血管紧张素(1-7)[angiotensin(1-7),Ang(1-7)]、Mas mRNA的表达水平;采用蛋白印迹(western blotting)法检测ACE2、Ang(1-7)、Mas蛋白的表达水平.结果 与Control组相比,LPS组细胞的增殖能力显著降低,IL-6、IL-8、TNF-α、MDA表达水平显著上升(P<0.01),GSH水平显著降低(P<0.01),ACE2、Ang(1-7)、Mas的mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.05);与LPS组比较,宣肺达郁汤含药血清各组细胞增殖抑制率均显著升高,IL-6、IL-8、TNF-α、MDA表达水平均显著降低(P<0.05),ACE2、Ang(1-7)、Mas的mRNA及蛋白表达量均显著增加(P<0.05).结论 宣肺达郁汤含药血清可能通过调控ACE2/Ang(1-7)/Mas通路抑制炎症因子释放、减轻氧化应激损伤,从而改善由LPS诱导的急性肺损伤A549细胞.
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