换一批利用Cre/lox重组系统获得无选择标记的SKTI抗虫转基因烟草
Construction of Selectable Marker-free SKTI Transgenic TobaccoPlants Conferring Resistance Against to Insect by Cre/lox System
摘要将置于两个同向lox位点之间的Bar基因表达盒与大豆胰蛋白酶抑制剂SKTI基因表达盒融合后获得相应植物表达载体,转化烟草Wisconsin 38后获得对棉铃虫具有明显抗性的SKTI转基因植株.SKTI转基因植株通过叶盘二次转化法导入Cre基因,对再生植株叶盘进行Basta的抗性检测,检测Bar基因的删除情况.结果表明:绝大多数再生植株对应叶盘在含8 mg/L PPT的筛选培养基上无法再生,Bar基因被删除的效率在38%～100%之间.对Bar基因删除区域进行PCR及克隆测序后发现Bar基因表达盒被精确删除.对Bar基因删除植株开花自交获得的分离后代进行NPTⅡ抗性检测, 5株NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有SKTI基因而无Cre基因存在,为无选择标记基因的SKTI转基因植株.
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关键词
Cre/lox重组系统SKTI基因无选择标记抗虫转基因烟草Cre/lox site-specific recombination systemSKTI genemarker freetransgenic tobacco resistant to insect
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发布时间
2010-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30200185）
重庆市教委应用基础项目（030208）
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