摘要以盐生植物盐芥为实验材料,选择经过Solexa测序筛选的盐芥tsa-miR 172a和tsa-miR 398b为目标基因,采用茎环的反转录PCR( stem-loop RT-PCR)方法分析其在盐芥根中的耐盐表达模式,以探讨盐芥miRNAs的stem-loop RT-PCR验证体系.结果显示,经过300 mmol·L-1 NaCI处理72 h后,与对照相比,盐芥根中的tsamiR172a上调表达,tsa-miR398b下调表达.用stem-loop RT-PCR方法进行tsa-miR 172a和tsa-miR398b扩增,对其电泳图进行光密度分析结果显示,盐胁迫处理与对照的比值分别为1.8和0.55,Solexa测序结果分别为2.00和0.44,说明两种方法所得结果基本一致.表明该研究建立J,盐芥miRNAs的stem- loop RT-PCR验证体系:每个miRNA设计3个引物(miRNA stem-loop引物、miRNA正向引物和miRNA通用反向引物);扩增条件为94℃2min,94℃15s,55℃45 s,23个循环.
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