换一批毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及表达分析
Cloning and Expression of an Cytosolic Ascorbate Peroxidase Gene from Populus tomentosa
摘要利用同源克隆技术得到1个毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因,命名为PcAPX.该基因编码249个氨基酸残基,预测分子量为33.01 kD.采用原核表达技术在大肠杆菌中表达并纯化该蛋白并进行酶活性分析,结果表明:重组PcAPX蛋白对抗坏血酸(AsA)和过氧化氢(H2O2)有很高的活性,其对抗坏血酸的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为(0.71±0.03) mmol·L-1和(0.41±0.02) mmol·L-1·min-1·mg-1；对过氧化氢的Km和Vmax分别为(0.60±0.21) mmol·L-1和(0.35±0.12) mmol·L-1·min 1·mg-1,表明PcAPX对AsA和H2O2拥有较高的催化底物的能力和催化效率.利用实时定量RT-PCR分析毛白杨PcAPX基因的表达模式,结果表明其在老叶中表达量高于新叶、韧皮部、形成层和根部.该研究结果将进一步促进毛白杨APX基因家族成员参与植物生长调控的研究.
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关键词
毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶克隆原核表达酶学分析Populus tomentosacytosolic ascorbate peroxidasecloningprokaryotic expressionenzymatic characteristics
栏目名称
DOI
10.7606/j.issn.1000-4025.2014.02.0231
发布时间
2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31170574）
新世纪优秀人才支持计划（NCET-08-0730）
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