换一批
换一批拟南芥多聚ADP核糖聚合酶Ⅰ的原核表达与活性检测
Prokaryotic Expression and Enzymatic Assay of Arabidopsis Poly(ADP-ribose) Polymerase
摘要采用RT-PCR技术获得了拟南芥多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP] PARP1基因的全长cDNA,转入原核表达载体pET32a并转化宿主菌Origami(DE3),加入终浓度为0.3 mmol/L IPTG,在16℃下诱导可获得较多的可溶重组蛋白.纯化TRX-PARP1,在反应液中加入NAD+和断裂DNA,通过SDS PAGE凝胶电泳和Western blotting分析,TRX-PARP1分子量可随着时间的延长逐渐增大,产生向上的弥散,表明蛋白质连上了ADP核糖分子;与此对比,作为参照的标签蛋白TRX无此现象.实验结果显示原核表达拟南芥PARP1能够催化自身多聚ADP核糖化修饰,为深入研究植物多聚ADP核糖聚合酶的功能奠定了基础.
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关键词
拟南芥翻译后修饰多聚ADP核糖聚合酶原核表达Arabidopsisposttranslational modificationpoly (ADP-ribose) polymeraseprokaryotic expression
分类号
Q786
栏目名称
研究报告
DOI
10.7606/j.issn.1000-4025.2014.05.0866
发布时间
2014-07-04
基金项目
国家自然科学基金
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