龙眼体细胞胚胎发生过程中DlWUS的克隆与表达分析

Cloning of DlWUS from Embryogenic Callus and Its Expression Analysis during Somatic Embryogenesis in Dimocarpus longan Lour.

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摘要以龙眼‘红核子’LCc悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型结构域蛋白的转录因子WUSCHEL(简称DlWUS)的cDNA全长及DNA序列,并进行序列分析与表达分析.结果表明:DlWUS的cDNA全长1 110 bp,开放阅读框(ORF)858 bp,共编码285个氨基酸(GenBank登录号为KM017506),DlWUS的DNA包含2个内含子.序列分析表明,DlWUS是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,亚细胞定位于细胞核,具跨膜结构和Homeodomain超级家族的保守结构域以及WUS转录因子家族特有的WUS box和EAR-like结构域,推测该目的基因确实为WUS转录因子.系统进化分析显示,龙眼DlWUS与脐橙WUS归为一个分支,亲缘关系较近.实时荧光定量PCR分析结果表明,在龙眼体细胞胚胎发生整个过程中,DlWUS均有表达,但仅在球形胚时期表达量较高,说明DlWUS可能主要在球形胚阶段发挥作用,并且在一定浓度范围内,外源施加IAA和GA3能够促进DlWUS基因的表达,而外源施加SA则抑制DlWUS基因的表达.