换一批丹参病程相关蛋白基因PR10的克隆与表达分析
Cloning and Expression Analysis of Pathogenesis-related Protein 10 Gene of Salvia miltiorrhiza
摘要病程相关蛋白(PR)的产生与积累是植物体应对生物或非生物胁迫的主要特征之一.该研究以人工培养的丹参幼苗为材料,通过分析丹参转录组数据,根据丹参病程相关蛋白基因PR10的序列设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从丹参中获得PR10基因的开放阅读框(ORF),命名为SmPR10-1(GenBank注册号KF877034),并进行原核表达和纯化.结果表明:(1)SmPR10-1基因ORF为477 bp,编码158个氨基酸,其蛋白质分子质量为17.38 kD.(2)通过蛋白结构预测、序列多重比对和构建进化树等生物信息学分析,发现SmPR10-1基因具有保守序列(G-X-G-G-X G)和(K-A-X-E-X-Y),其编码蛋白与葡萄等双子叶植物中的PR10蛋白同源性较高.(3)经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,含有表达载体pET32a-SmPR10-1的大肠杆菌(Escherichia coli-BL21)可诱导表达融合蛋白;对影响蛋白表达的4个因素优化结果表明,SmPR10-1蛋白的最佳表达条件为:IPTG终浓度0.4 mmol/L、起始宿主菌密度A600为0.8、诱导温度30℃、诱导时间8h,并得到纯化的SmPR10-1蛋白.该结果为进一步研究SmPR1 0-1基因在丹参抗病方面的生物学功能和培育丹参抗病品种奠定了基础.
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关键词
丹参病程相关蛋白生物信息学分析原核表达条件优化Salvia miltiorrhizapathogenesis-related proteinbioinformatic analysisprokaryotic expressionoptimization of expression condition
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DOI
10.7606/j.issn.1000-4025.2015.06.1078
发布时间
2015-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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