TUNEL法检测Cu2+胁迫诱导的中国树花共生藻细胞的死亡

TUNEL Detection of Cu2+ Induced Cell Death of the Phycobionts in Lichen Ramalina sinensis

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摘要为了探讨铜离子胁迫对中国树花共生藻细胞毒害作用的机制及细胞死亡的原因,通过徒手切片,采用两种TUNEL检测法(Promega和Roche试剂盒)对2 mmol/L和4 mmol/L Cu2+胁迫24 h的中国树花地衣体共生藻细胞凋亡情况进行观察.结果表明:(1)伊文思蓝染色法检测结果显示,中国树花共生藻细胞活力在2和4 mmol/LCu2+胁迫下显著降低,其细胞的死亡率随着Cu2+浓度的提高和处理时间的延长而明显增加;(2)在2和4 mmol/LCu2+胁迫条件下,中国树花共生藻细胞的TUNEL阳性细胞率在Promega试剂盒中检测结果分别为50.30％和31.21％,而在Roche试剂盒中共生藻细胞TUNEL阳性标记核分别为53.17％和36.88％,两种TUNEL检测法结果类似.(3)与伊文思蓝染色法检测的Cu2+胁迫中国树花共生藻细胞活力相比,发现较低浓度的Cu2+(2 mmol/L)胁迫对地衣共生藻细胞的毒害作用可诱导启动细胞凋亡程序,而较高浓度的Cu2+(4 mmol/L)胁迫对地衣共生藻产生较严重的毒害则导致大部分细胞的坏死,只有极少数细胞出现细胞凋亡.(4)两种试剂盒均可用于较低浓度Cu2+胁迫引起的地衣体共生藻细胞凋亡的检测;直接将徒手切片材料用于TUNEL细胞凋亡原位检测中也得到了较理想的结果,避免了制备石蜡切片的繁琐步骤,缩短实验时间,简化了实验流程.