摘要该实验依据现有发根农杆菌侵染法,以银杏无菌苗叶片为外植体,对农杆菌诱导银杏毛状根的实验操作进行优化,并观察记录银杏毛状根继代生长情况,测定继代不同天数的毛状根组织内多酚含量、多酚合成相关酶基因和POD基因相对表达量,以探讨银杏毛状根褐化的生理机制.结果显示:(1)银杏农杆菌侵染最适预培养时间为3d、菌种为R1601、共培养基为White、侵染时间为30 min,优化侵染操作后的银杏毛状根诱导率可达72.36％;银杏毛状根继代生长的最适IBA浓度为0.5 mg/L.(2)银杏毛状根初始发根时颜色为乳白色,多在伤口处簇生,伸长生长时无向地性,不分叶正背面都能在伤口处诱导出根,且在除菌培养20 d时毛状根长可达0.4～0.8 cm;继代培养25 d时毛状根为白色,继代35 d时部分毛状根从根部至中部开始转黄,继代45 d时大部分毛状根由白转黄,根部至中部开始有褐化出现.(3)继代35 d时毛状根的PAL、C4H、4CL和POD基因表达量分别为25 d的68％、44％、51％、52％;继代45d时PAL、C4H、4CL、POD基因表达量分别为35 d的19％、75％、86％、105％.(4)继代35d、45 d的银杏毛状根总酚类含量分别为17.14和13.78mg/g.研究发现,PAL基因表达量变化与其下游的两个关键酶基因(C4H、4CL)表达量变化不一致,且PAL基因表达量的大幅降低并未对下游C4H、4CL基因表达有明显影响,说明PAL基因表达量变化对其下游合成速率影响不大,可能不是银杏毛状根苯丙氨酸代谢途径的限速酶;而C4H与4CL基因表达量变化趋势高度一致,说明C4H应是该途径中的限速酶之一;推测继代前期可能是由PPO作为关键酶参与毛状根褐化反应,导致后期毛状根生长受抑制,POD基因表达水平随之上升,POD参与褐化反应.