换一批
换一批摘要目的：探讨宫颈癌细胞株Hela中组成型光形态发生因子9信号复合体6( CSN6)对E6-AP及其目标蛋白p53的调节及其分子机制。方法：重组慢病毒干扰载体质粒转染Hela细胞,降调CSN6表达。 Western blot法检测E6-AP表达,实时荧光定量PCR检测p53下游基因表达变化。分别将蛋白酶抑制剂MG132、真核生物蛋白合成抑制剂放线菌酮( CHX)和高表达CSN6的Flag-CSN6质粒分别作用于Hela细胞,Western blot法检测E6-AP蛋白表达。将重组慢病毒质粒shRAN CSN6转染Hela细胞48 h后,泛素化检测分析CSN6调节E6-AP蛋白表达的分子机制。试验组裸鼠皮下接种shRNA-CSN6细胞株,对照组接种shRNA-vector细胞株,观察肿瘤体积变化。结果：放线菌酮( CHX)可下调E6AP表达,抑制CSN6表达后E6-AP下调更显著；MG132可使E6AP表达增加,CSN6可加强该作用；抑制CSN6表达后, Hela细胞和裸鼠肿瘤组织中p53下游相关基因表达增加,裸鼠肿瘤生长缓慢。泛素化检测提示, CSN6可抑制E6-AP蛋白的泛素化水解,并呈剂量依赖性。结论：宫颈癌细胞株Hela中CSN6上调E6 AP是通过抑制E6-AP蛋白的泛素化水解,稳定其在细胞中的表达,实现对p53的持续降解。
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