换一批
换一批神经细胞黏附分子L1-Ig(1-4)的原核表达及其功能
Prokaryotic expression of neural cell adhesion molecule L1-Ig (1-4) and its function
摘要目的:利用基因克隆、表达、纯化等分子生物学手段获取具有生物活性的神经细胞黏附分子L1(L1)的Ig(1-4)结构域融合蛋白.方法:实验于2001-10/2004-12在解放军第二军医大学神经生物教研室完成.①从新生4 d的SD大鼠的海马组织中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应法获取L1-Ig(1-4)基因,进行序列分析后构建表达载体pET28a(+)-L1-Ig(1-4).②转染大肠杆菌BL21,用IPTG诱导L1-Ig(1-4)的表达.③利用Ni2+-NTA柱纯化和复性.④用L1-Ig(1-4)融合蛋白观察培养脊髓原代神经元轴突生长情况及其活性,未加入融合蛋白的细胞做对照.结果:①克隆出编码正确的大鼠L1-Ig(1-4)基因.②并在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物占全菌总蛋白的28.3%.③Ni2+-NTA柱纯化后的纯度达90%以上.④加入融合蛋白后脊髓神经元突触的生长能力较未加入融合蛋白的细胞增强[(56±3.8),(43±2.7)μm,P＜0.01].结论:通过原核表达可大量获得L1-Ig(1-4)融合蛋白,该融合蛋白同样具有促神经生长的生物学活性.
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主题词
神经元(Neurons)蛋白(Egg White)神经细胞黏附分子类(Neural Cell Adhesion Molecules)基因扩增(Gene Amplification)基因表达(Gene Expression)
分类号
R3
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1673-8225.2006.21.031
发布时间
2006-06-14
基金项目
中国科学院资助项目（39870759）
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