摘要背景:研究表明壳聚糖可间接促进成纤维细胞的增生和胶原的合成.利用壳聚糖和特定的成纤维细胞一起构建肌腱损伤修复的组织工程材料,以期在促进损伤修复的同时防止粘连.目的:观察水溶性壳聚糖对3T3TK成纤维细胞生长及表型的影响.设计:观察对照实验.单位:九江学院医学院.材料:3T3TK成纤维细胞由中国科学院细胞库提供.水溶性壳聚糖(规格:60目、30CPS,济南海得贝海洋生物工程有限公司),DMEM(低糖)(美国GIBCO公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程研究所),青霉素、链霉素(美国Biosharp公司),胰蛋白酶(北京博大泰克生物基因技术有限责任公司).方法:实验于2004-11/2006-04在九江学院医学科研中心的系统生物学临床应用实验室(江西省高校重点实验室)完成.①常规培养3T3TK成纤维细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,接种96孔板,共设5组,每组5孔,共25孔,每孔加细胞悬液200 μL,培养24 h后弃上清,前4组各孔分别加入含不同浓度壳聚糖的DMEM培养液200 μL,壳聚糖终浓度分别为1,0.1,0.01,0.001 g/L,第5组为阴性对照组,加不含壳聚糖的DMEM培养液,采用CellTilter-GloTM细胞活力测试盒检测不同浓度壳聚糖对成纤维细胞活力的影响.②常规培养细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,接种24孔板,共设4组,前3组每孔分别加入含1,0.1,0.01 g/L壳聚糖的DMEM培养液1 mL,第4组为阴性对照组.采用羟脯氨酸、碱性磷酸酶试剂盒分别检测细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量.主要观察指标:①水溶性壳聚糖对体外培养成纤维细胞活力影响.②细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量.结果:①细胞活力检测结果:不同浓度壳聚糖组与阴性对照组相比,细胞活力差异均无统计学意义(P＞0.05).②细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量:1 g/L和0.1 g/L浓度壳聚糖组细胞培养上清液中的羟脯氨酸含量分别为(7.598±0.770),(8.366±0.308)mg/L,高于阴性对照组[(11.269±0.707)mg/L,P＜0.01];胶原含量分别为(56.703±5.748),(62.437±2.301)mg/L,低于阴性对照组[(84.099±5.280)mg/L,P＜0.01].,随壳聚糖浓度的上升,胶原含量下降,呈剂量依赖.与阴性对照组相比,各浓度壳聚糖组细胞培养上清液中碱性磷酸酶活性均无显著差异(P＞0.05).结论:水溶性壳聚糖并不明显抑制3T3TK成纤维细胞的活力,但能使其分泌胶原的量显著减少,提示壳聚糖具有作为肌腱修复的组织工程材料,并抑制肌腱修复中粘连形成的潜力.