摘要背景:裸DNA在基因治疗中易被体内核酸酶降解.携载DNA疫苗的病毒类载体存在致癌和引发免疫应答等安全问题,且制备方法复杂.非病毒载体(尤其是阳离子-DNA聚合物)具有低毒,低免疫反应,能重复给药,易于大量制备等优点.壳聚糖是一种天然阳离子碱性聚多糖,具有良好的生物可降解性、生物相容性及生物安全性.目的:制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖,观察其表征及对DNA的保护作用.设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-06/2008-05在浙江省医学科学院牛物T程研究所完成.材料:壳聚糖,脱乙酰度88%,批号061220,由青岛利中甲壳质公司提供.质粒pHEV23为浙江省医学科学院生物工程研究所实验室提供.方法:通过脱水剂Na2SO4诱导的复凝聚沉淀法制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖.根据壳聚糖质量浓度1.4,0.7,0.4g/L,分别制备壳聚糖(高)-pHEV23、壳聚糖(中)-pHEV23、壳聚糖(低)-pHEV23.主要观察指标:激光纳米粒度分析仪测定壳聚糖-pHEV23粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率:凝胶阻滞实验分析壳聚糖和pHEV23的聚合;DNase Ⅰ的保护试验分析壳聚糖-pHEV23的抵抗核酸酶降解能力;释放实验评价壳聚糖-pHEV23的稳定性.结果:制各的壳聚糖-pHEV23粒径在170-470nm.其中壳聚糖(低)-pHEV23 171.6 nm,壳聚糖(中)-pHEV23 387.0 nm,壳聚糖(高)-pHEV23 467.3 nm.壳聚糖(低)-pHEV23 Zeta电位为+22.9 mV.包封率均＞95%,其中壳聚糖(低)-pHEV23 95.8%,壳聚糖(中)-pHEV23 96.7%,壳聚糖(高)-pHEV2397.1%.凝胶阻滞分析表明,壳聚糖和pHEV23之间通过静电作用完全结合,纳米粒带正电荷.DNase Ⅰ保护试验表明,壳聚糖-pHEV23能有效抵抗DNase Ⅰ酶降解,对pHEV23有保护作用.稳定性试验表明,4℃保存60 d.纳米粒仍能较稳定地包裹pHEV23.结论:壳聚糖-pHEV23能高效装载外源DNA,稳定性良好,并保护其免受核酸酶的降解.