小鼠胚胎干细胞Notch1基因沉默对糖原合酶激酶3β和周期蛋白依赖性激酶5表达的影响

Effects of Notch1 gene silencing in mouse embryonic stem cells on glycogen synthase kinase-3 beta and cyclin-dependent kinase 5 expression

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摘要背景:GSK-3β与CDK-5都属于磷酸化蛋白激酶,一并参与胚胎神经细胞分化发育具体机制尚不清楚.目的:观察胚胎干细胞Notch1基因沉默后Hes-1、PS1、GSk-3β和Cdk5表达的变化以及Notch信号对Gsk-3β和Cdk5表达的调节作用及对早期神经细胞分化发育的潜在影响.方法:通过阳离子脂质体转染法将Notch1 siRNA真核表达载体转入小鼠胚胎干细胞.倒置显微镜下观察转染前后细胞的形态变化;48h后收集细胞,RT-PCR检测包括Notch1在内的Hes-1、PS1、Gsk-3β和Cdk5基因水平表达情况,单因素方差分析各组间差异.结果与结论:①RT-PCR检测到转染pSINsi-U6-Notch1质粒组胚胎干细胞Notch1、Hes-1、GSK-3β和Cdk5的表达情况较转染空质粒组与正常对照组显著降低(P<0.05),转染空质粒组与正常对照组之间无明显差异(P>0.05,n=5).②倒置显微镜下观察未见外源质粒的转入对胚胎干细胞克隆性生长的影响,只是转染pSINsi-U6-Notch1质粒组胚胎干细胞的增殖量较其他两组有所降低.③胚胎干细胞PS1表达情况3组间无显著差异(P>0.05).可以看出,胚胎干细胞Notch1基因表达水平的降低导致蛋白激酶GSK-3β、Cdk5表达的下调.