换一批
换一批摘要背景:体外培养神经干细胞,在悬浮培养时由于自身增殖特性会形成球,传代时将会面临如何将细胞球分离成单细胞的问题.目的:寻求理想的大鼠海马神经干细胞传代方法,以获得大量可增生的神经干细胞以供研究. 方法:分离新生1 d SD大鼠海马神经干细胞,原代培养至五六天时,分别用机械吹打法、胰蛋白酶、TrypLE和Accutase消化法分离神经干细胞球.之后每7 d传代1次,连续传代3次.分别于每次传代后第1天和传代后第4天计数活细胞比例和细胞球数目,实验重复3次. 结果与结论:神经干细胞球经3种酶消化后获得的均是单细胞;经机械吹打后既有单个细胞,也有小细胞球分布于培养液中.在酶消化法中,Accutase消化法传代后神经干细胞的活细胞比例明显高于胰蛋白酶消化(P < 0.01)和TrypLE消化法 (P < 0.05).同时,Accutase消化法传代后新形成的细胞球数目也较其余各组多(P < 0.01).提示在实验条件下,Accutase消化法能够较好地将神经干细胞球分离成存活率较高、能快速形成新的克隆球的单个细胞,是较为理想的神经干细胞分离传代方法.
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