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含人AGM区、胎肝及骨髓基质细胞培养体系程序化诱导小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的分化

Effects of sequential inductive systems with feeder cells from human aorta-gonad-mesonephros region, fetal liver and bone marrow on the differentiation of mouse embryonic stem cells into hematopoietic stem cells

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摘要背景:前期已分别制备人主动脉-性腺-中肾区基质细胞系及胎肝基质细胞系,发现前者可促进小鼠胚胎干细胞定向分化为造血干细胞.目的:模拟胚胎发育过程中永久造血发育的时空顺序,探讨人主动脉-性腺-中肾(AGM)区、胎肝(FL)及骨髓(BM)基质细胞对小鼠胚胎干细胞体外诱导分化为造血干细胞的支持作用,以寻求更佳的诱导条件.方法:将小鼠E14 胚胎干细胞诱导为拟胚体(EB),并利用Transwell 非接触共培养体系依次在人主动脉-性腺-中肾区、胎肝及骨髓基质细胞饲养层上进一步诱导分化,按不同诱导阶段分为拟胚体对照、EB/AGM、EB/AGM+FL 和EB/AGM+FL+BM共4 组.共培养6 d 后分别收获各组拟胚体来源细胞,以流式细胞仪检测Sca-1+c-Kit+细胞含量,进行各系造血细胞集落形成单位分析并观察细胞形态.结果与结论:①EB/AGM+FL 组和EB/AGM+FL+BM 组收获细胞涂片均发现原始造血细胞.②拟胚体来源细胞经AGM 区基质细胞诱导后Sca-1+c-Kit+ 细胞明显升高(P < 0.05).③拟胚体对照组造血细胞集落形成单位低于其他各组(P < 0.05),而EB/AGM+FL、EB/AGM+FL+BM组造血细胞集落形成单位计数亦较EB/AGM组明显增高.提示AGM+FL 和AGM+FL+骨髓基质细胞微环境对原始造血干细胞的扩增效应均明显高于单纯主动脉-性腺-中肾饲养层.

作者蔡耘 ^[1] 张绪超 ^[2] 陈惠芹 ^[1] 黄绍良 ^[3] 学术成果认领

作者单位 中山大学附属第三医院儿科,广东省广州市510630;中山大学附属第二医院干细胞研究中心,广东省广州市510120 ^[1] 中山大学附属第二医院干细胞研究中心,广东省广州市510120;广东省人民医院医学研究中心,广东省广州市,510080 ^[2] 中山大学附属第二医院干细胞研究中心,广东省广州市,510120 ^[3]

关键词主动脉-性腺-中肾区肝脏骨髓胚胎干细胞造血干细胞

医学主题词细胞(Cells)骨髓(Bone Marrow)造血干细胞(Hematopoietic Stem Cells)主动脉(Aorta)性腺(Gonads)

分类号 R394.2（医学遗传学）

栏目名称

研究与报告

DOI 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.27.007

发布时间 2011-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（30300377）广东省科技计划（2008B030301046）