换一批
换一批CHOP基因shRNA载体构建及沉默效应
Gene-silencing effect and small hairpin RNA vector construction of targeting human CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein gene
摘要背景:研究认为,CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)通路是内质网应激介导细胞凋亡的3 条通路之一,目前国内外对内质网应激介导细胞凋亡在胃癌方面的研究较少.目的:构建针对人CHOP 基因的短发卡RNA 表达载体,观察RNA 干扰对人胃癌细胞系BGC823 细胞CHOP 基因表达的抑制作用.方法:设计CHOP 的shRNA 靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入真核表达载体pSUPER-EGFP1,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人胃癌细胞系BGC823 细胞,采用RT-PCR 和Western blotting 分别检测CHOP 基因mRNA 和蛋白表达的变化.结果与结论:把针对CHOP 基因的shRNA 的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPER-EGFP1 载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR 和Western blot 检测显示,CHOP 基因的表达水平明显降低,其中以CHOP-1 为靶序列的shRNA 沉默作用最强,CHOP 的表达抑制率约67%.
更多相关知识
- 浏览594
- 被引2
- 下载25
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
