换一批
换一批摘要背景：人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)是人的主要组织相容性复合物，在移植排斥反应中起关键作用。降低HLA的表达，可以延长移植物的存活时间。<br> 目的：设计HLA-A2小干扰RNA，检测其对HLA-A2表达沉默的作用。<br> 方法：设计4种HLA-A2 siRNA靶点序列构建其慢病毒表达体系，体外感染HLA-A过表达的293T细胞，观察4种靶点的敲减效率并筛选出有效靶点序列。体外培养人胚肺成纤维细胞，并用携带目的干扰序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞，荧光显微镜下观察感染效率，应用 Western blot 检测在人胚肺成纤维细胞中对HLA-A2表达沉默的作用。<br> 结果与结论：根据Genbank中HLA-A2的mRNA序列，设计合成了3个小干扰RNA，在体外能有效的沉默HLA-A2在293细胞中的表达，将基因序列亚克隆入干扰载体后感染人胚肺成纤维细胞，也能有效的沉默HLA-A2的表达，效率达80%左右。
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关键词
组织构建组织工程人类白细胞抗原A2RNA干扰基因沉默人胚肺成纤维细胞辽宁省自然科学基金HLA antigensRNA interferencegene silencingfibroblasts
分类号
R318
栏目名称
技术与方法 -- 组织构建基础实验
DOI
10.3969/j.issn.2095-4344.2014.29.003
发布时间
2014-08-23
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