重组9型腺相关病毒载体转染动脉粥样硬化模型小鼠主动脉:最佳在体表达时间点的确定

Recombinant adeno-associated virus serotype 9 transfection of atherosclerosis mice:determination of the optimal expression time in vivo

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摘要背景：重组9型腺相关病毒载体对心肌组织具有较高的亲和力，关于携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus serotype 9-enhanced green fluorescent protein， rAAV9-eGFP)在动脉粥样硬化模型小鼠主动脉中的表达情况还不确定。<br>　　目的：探索携带rAAV9-eGFP转染动脉粥样硬化模型小鼠主动脉最佳的在体表达时间点。<br>　　方法：给予30只ApoE-/-小鼠连续高脂饮食饲养16周建立为动脉粥样硬化模型，然后随机取其中25只通过尾静脉注射转染5.0×1011 vg(virus genomes)rAAV9-eGFP，另5只作为对照组给予生理盐水。转染病毒的动脉粥样硬化模型小鼠分别于转染后14，21，28，35，60 d处死，留取主动脉组织，应用激光共聚焦显微镜观察增强型绿色荧光蛋白荧光表达情况，Western blot 法检测主动脉增强型绿色荧光蛋白的蛋白表达，观察增强型绿色荧光蛋白体内表达情况，确定病毒在体表达最佳时间点。<br>　　结果与结论：rAAV9-eGFP 可有效转染动脉粥样硬化模型小鼠主动脉血管，增强型绿色荧光蛋白可在主动脉组织中表达，其表达强度随着转染时间的增加而逐渐增强，于转染35 d时表达最强，60 d趋于稳定，各时间点主动脉斑块中增强型绿色荧光蛋白表达的水平差异有显著意义(P<0.001)。表明rAAV9-eGFP可有效在动脉粥样硬化模型ApoE-/-小鼠主动脉中表达，rAAV9-eGFP可成为动脉粥样硬化治疗的最佳载体。