人肺鳞癌来源肺癌干细胞原代培养:数量及功能变化
Changes of lung cancer stem cells in patients with lung squamous carcinoma during primary culture
摘要背景:研究显示可从肺癌细胞系中分离出肺癌干细胞,但对于从新鲜肺鳞癌标本中原代培养肺癌干细胞的报道较少。<br> 目的:探索从新鲜肺鳞癌组织标本中分离肺鳞癌干细胞的可行方法,及其在原代培养过程中的数量和功能变化。<br> 方法:借助胶原酶消化法、密度梯度离心法和Hoechst33342染料外排法初筛SP细胞,将初筛细胞置于条件培养基分离培养,后续应用流式细胞分析及分选技术,进一步分离纯化肺鳞癌干细胞。实验结合 CD133和CD44鉴定目标细胞,计数第1代和第4代肺癌干细胞的CD133+、CD44+和CD133/CD44双阳性细胞数;检测第1代和第4代肺癌干细胞的单细胞克隆形成能力、平板集落形成能力和细胞球形成能力。<br> 结果与结论:传代培养第4代肺癌干细胞的CD133+、CD44+和CD133/CD44双阳性细胞数明显增多,流式细胞检测结果显示,第4代和第1代的CD133+和CD133/CD44双阳性细胞表达率差异有显著性意义,第4代和第1代肺癌干细胞的CD44+细胞表达率差异无显著性意义。第4代细胞的单细胞克隆形成能力,平板集落形成能力和细胞球形成能力比均明显强于第1代肺癌干细胞。实验初步从肺鳞癌患者新鲜肺组织标本中分离培养并获取干细胞样肺鳞癌细胞,且在体外稳定快速扩增,为进一步研究肺鳞癌干细胞的异质性和耐药性奠定基础。
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