大鼠皮质少突胶质细胞培养条件的优化

Optimization of culture conditions for oligodendrocytes of the rat cerebral cortex

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摘要背景：由于少突胶质细胞主要来自少突前体细胞，实验通过提取少突胶质前体细胞获取少突胶质细胞的过程中，选择合适的培养基和细胞接种密度对生长及形态学观察具有重要影响。目的：对比优化少突胶质细胞的培养条件。方法：取48 h内的SD新生鼠大脑皮质前体少突胶质细胞。分别用DMEM/高糖、DMEM/F12培养基培养少突胶质前体细胞，每组接种密度分别2×104/cm2，4×104/cm2，8×104/cm2，16×104/cm2，32×104/cm2，64×104/cm2；分别于少突胶质前体细胞贴壁72 h后，进行诱导分化，分化7 d后的少突胶质前体细胞在光镜下观察细胞形态变化并通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。结果与结论：DMEM/高糖、DMEM/F12培养基以2×104/cm2，4×104/cm2，8×104/cm2接种密度时，可辨识完整少突胶质前体细胞形态。诱导分化7d后，免疫荧光鉴定提示3组少突胶质前体细胞均可呈现髓鞘碱性蛋白阳性，F12组中2×104/cm2，4×104/cm2，8×104/cm2接种密度条件下细胞均数分别为16.40±3.30，49.95±2.33，76.95±4.86，高于相应条件下的高糖组12.65±2.53，32.10±1.17，54.05±1.56(P<0.05)。结果表明，DMEM/F12较DMEM/高糖培养基适于少突胶质细胞培养，在一定范围内，少突胶质前体细胞分化为少突胶质细胞随接种密度成梯度增多，接种密度在4×104/cm2-8×104/cm2范围对观察细胞形态观察较为适合。

作者杨凯 ^[1] 李一鹏 ^[2] 刘英富 ^[3] 程远驰 ^[1] 汤锋武 ^[4] 梁冰 ^[4] 徐忠伟 ^[2] 陈旭义 ^[5] 学术成果认领

作者单位锦州医科大学武警后勤学院附属医院研究生培养基地，辽宁省锦州市 121000; 武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所，天津市 300162; 武警后勤学院附属医院，天津市 300162 ^[1] 天津中医药大学,天津市,300193 ^[2] 武警后勤学院,天津市,300162 ^[3] 武警后勤学院附属医院,天津市,300162 ^[4] 武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所，天津市 300162; 武警后勤学院附属医院，天津市 300162 ^[5]

关键词组织构建组织工程少突胶质前体细胞少突胶质细胞细胞密度培养基分化国家自然科学基金

主题词细胞(Cells)培养基(Culture Media)接种(Vaccination)大鼠(Rats)组织(Tissues)

分类号 R318

栏目名称 技术与方法 -- 组织构建细胞学实验

DOI 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.29.010

发布时间 2016-07-27

基金项目

国家自然科学基金(11102235) 天津市科技支撑项目(14ZCZDGX00500) 天津市卫生局课题(2013KZ134，2014KZ135) 武警后勤学院附属医院种子基金(FYM201417，FYM201432，FYM201542，WHJ2015018) 武警后勤学院博士启动基金(WHB201417，WHB201514) 武警后勤学院中心实验室开放基金