果糖和二硫苏糖醇对骨髓间充质干细胞冻存后活性及多能性的影响

Effect of fructose and dithiothreitol on cell viability and pluripotency of cryopreserved bone marrow mesenchymal stem cells

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摘要背景：冻存是保证干细胞临床应用的关键步骤之一，但现有冻存技术常导致细胞活性降低、多能性丧失及分化能力下降。<br>　　目的：探究果糖及二硫苏糖醇是否有助于维持冻存后骨髓间充质干细胞多能性及成骨分化潜能。<br>　　方法：分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，在细胞冻存前分别用果糖(200μmol/L)，二硫苏糖醇(500μmol/L)及果糖(200μmol/L)+二硫苏糖醇(500μmol/L)预处理1 h。冻存6个月后，复苏细胞并用倒置显微镜观察细胞形态，MTT实验检测细胞活性，定量PCR检测相关干性基因(Nanog，Oct4及Sox2)的表达，碱性磷酸酶活性测试及茜素红染色检测复苏骨髓间充质干细胞成骨分化能力。<br>　　结果与结论：①复苏后各组细胞在形态上无明显差别；②果糖预处理及联合预处理有助于骨髓间充质干细胞活性维持；③二硫苏糖醇预处理可显著促进骨髓间充质干细胞多能性相关基因Nanog及Sox2的表达；④果糖、二硫苏糖醇及联合预处理皆有助于维持骨髓间充质干细胞成骨分化潜能，但以二硫苏糖醇及联合预处理组效果最佳；⑤结果表明，果糖预处理有助于维持冻存骨髓间充质干细胞活性，二硫苏糖醇有助于维持冻存骨髓间充质干细胞多能性及成骨分化能力。