半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺递送siRNA对肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中MRE11表达的影响

Effect of small interfering RNA delivery using galactosylated chitosan-graft-polyethylenimine on MRE11 gene expression in drug-resistant hepatocellular carcinoma BEL7402/5-Fu cells

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摘要背景:壳聚糖是一种常用的非病毒载体,具有良好生物相容性、生物可降解性、低毒等优点,但其基因递送能力相对较弱,常需要进行结构衍生修饰.目的:观察半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺(LA-CS-PEI)在肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中递送siRNA的能力及对减数分裂重组蛋白11(MRE11)表达的影响.方法:①将肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu或人肝细胞HL-7702分别与0,10,20,40,80,100 mg/L的LA-CS-PEI或壳聚糖-聚乙烯亚胺共培养24 h,检测细胞存活率;②将LA-CS-PEI与siRNA-FAM分别以0,2,4,8,16,32的质量比混合,制备复合转染颗粒.以复合转染颗粒转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu,48,72,96 h后,以转染效率筛选最佳质量比与转染时间,进行下步实验;③以复合转染颗粒、LA-CS-PEI、siRNA分别转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu 48 h后,以未转染的细胞为空白对照,检测MRE11基因及蛋白的表达.结果与结论:①与壳聚糖-聚乙烯亚胺相比,LA-CS-PEI毒性更低,且当LA-CS-PEI质量浓度高达100 mg/L时,仍表现出很低的细胞毒性;②LA-CS-PEI与siRNA-FAM质量比为4和8时转染效率均达95%以上,入胞效率极高,转染48 h转染效果最好,所以后续实验选择质量比为8,转染时间为48 h的复合转染颗粒;③复合转染颗粒组MRE11基因及蛋白表达低于LA-CS-PEI组、siRNA组、空白对照组(P<0.05);④结果表明,LA-CS-PEI能实现siRNA的有效递送,并能沉默肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu中的MRE11基因.

作者刘云 ^[1] 潘杰 ^[2] 董伟 ^[3] 惠景 ^[3] 李三华 ^[1] 范芳 ^[3] 朱欣婷 ^[3] 学术成果认领

作者单位遵义医学院贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室,贵州省遵义市,563000 ^[1] 遵义医学院基础医学院,贵州省遵义市 563000;仁怀市人民医院病理科,贵州省仁怀市 564500 ^[2] 遵义医学院贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室,贵州省遵义市 563000;遵义医学院基础医学院,贵州省遵义市 563000 ^[3]

关键词生物材料材料相容性半乳糖基化壳聚糖-聚乙烯亚胺去唾液酸糖蛋白受体减数分裂重组蛋白11 RNA干扰肝癌细胞BEL7402/5-Fu

主题词细胞(Cells)肝肿瘤(Liver Neoplasms)壳聚糖(Chitosan)转染(Transfection)聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine)

分类号 R318

栏目名称 药物控释材料

DOI 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.06.020

发布时间 2017-03-27

基金项目

贵州省科技厅社会发展攻关项目 遵义医学院招标项目 贵州省教育厅特色重点实验室建设项目(黔教合KY字[2014]212) the Social Research and Development Project of Guizhou Science and Technology Department, No. SY[2013]3008 the Tender Project of Zunyi Medical University, No. F-614 the Key Lab Construction Project of the Educational Department of Guizhou Province, No. KY[2014]212