摘要背景:目前,小鼠神经干细胞的体外培养技术已被众多科研平台熟练掌握,但是各科研平台在培养脑源性神经干细胞时所使用的脑组织有很大差异.胎龄14 d(E14)小鼠脑组织被广泛用于培养胎鼠神经干细胞,而对于此时胎鼠不同脑组织中所含神经干细胞的详细比例及其间有无差异,目前研究较少.目的:比较E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异,为后期优化分离高纯度神经干细胞提供直接量化数据和前期研究基础.方法:分离E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织,加入胰酶消化成单细胞,贴壁培养3.0-4.0 h,然后通过细胞免疫荧光实验,用DAPI标记总细胞,神经干细胞特异性抗原Nestin标记神经干细胞,神经元特异性抗原Tuj1标记神经元,统计分析Nestin+/DAPI和Tuj1+/DAPI所占比例.另外,通过实时荧光定量PCR技术检测E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中Nestin和Tuj1 mRNA的表达水平.结果与结论:①细胞免疫荧光结果显示,E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中均有大量Nestin+和Tuj1+细胞存在;小鼠前脑组织中Nestin+细胞所占比例最高,明显高于全脑(P<0.01)和大脑皮质(P<0.05);而前脑组织中Tuj1+细胞比例明显低于全脑(P<0.05)和大脑皮质(P<0.001).该结果表明,与全脑和大脑皮质相比,前脑组织中神经干细胞所占比例最高,神经元所占比例最低;②Real time PCR结果显示,E14小鼠前脑组织中Nestin mRNA表达水平最高,明显高于全脑组织(P<0.05),略高于大脑皮质(P>0.05),说明前脑组织中有较多神经干细胞存在;而Tuj1 mRNA的表达水平明显低于全脑组织(P<0.05)和大脑皮质组织(P<0.05),说明前脑组织中有较少神经元存在;③综合以上结果,与全脑和大脑皮质相比,分离、消化E14小鼠前脑组织所获得的神经干细胞比例最高,是后期培养优质神经干细胞的重要前提.