建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型PDIA3的表达变化及临床意义

Expression and clinical significance of protein disulfide-isomerase A3 in a rabbit model of spinal cord ischemia/reperfusion injury

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摘要背景:目前认为脊髓缺血再灌注损伤是造成脊髓减压手术后"二次瘫痪"的主要原因,而控制应激相关蛋白和兴奋性氨基酸对脊髓缺血再灌注损伤的治疗至关重要.目的:观察蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)在兔脊髓缺血再灌注损伤后表达变化.方法:依据Zivin法建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型,将36只新西兰白兔随机均分成6组,对照组只显露腹主动脉而不阻断血流,30 min后关闭腹腔;实验组阻断腹主动脉血流30 min后分别再灌注0,6,12,24,48 h再关闭腹腔.首先均利用改良Tarlov评分进行运动功能评价;随后取损伤段腰髓(L3-L5),结合荧光差异双向凝胶电泳和质谱分析筛选出PDIA3;其次应用免疫印迹印证质谱;最后通过免疫组织化学结果观察其在脊髓内的时间和空间表达变化特点.结果与结论:①运动功能评分结果:实验动物于脊髓缺血再灌注损伤发生后均可见后肢功能逐渐好转现象,评分结果为缺血再灌注24 h达最高水平,48 h又略有下降;②免疫印迹结果:对照组PDIA3表达有清晰印迹显示,缺血再灌注0 h印迹轻度增强,6-12 h进一步增强,24 h显著减弱至最低水平,48 h再次升高到6-12 h水平;③免疫组织化学结果:神经元胞浆中可见PDIA3表达,且中间神经元表达量明显多于运动神经元;④结果表明:脊髓缺血再灌注损伤发生发展过程中PDIA3异常上调,说明PDIA3与脊髓缺血再灌注损伤密切相关,可作为其诊断和治疗的新靶点.

作者李春旭 ^[1] 张善勇 ^[1] 齐治平 ^[1] 夏鹏 ^[1] 潘肃 ^[1] 昝春芳 ^[1] 杨小玉 ^[1] 学术成果认领

作者单位吉林大学第二医院骨科,吉林省长春市,130041 ^[1]

关键词组织构建组织工程脊髓缺血再灌注损伤蛋白质二硫键异构酶A3 应激国家自然科学基金

主题词脊髓缺血(Spinal Cord Ischemia)再灌注损伤(Reperfusion Injury)兔(Rabbits)蛋白质二硫化物异构酶类(Protein Disulfide-Isomerases)组织(Tissues)

分类号 R318

栏目名称 组织构建实验造模

DOI 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.24.013

发布时间 2017-09-13

基金项目

国家自然科学基金 吉林省科技型中小企业技术创新基金 吉林大学研究生创新基金资助项目(2017176) Funding:the National Natural Science Foundation of China, No. 31572217 and 81350013 the Technology Innovation Foundation of Small and Medium-Sized Technology-Based Enterprise in Jilin Province, No.SC201502001 the Innovation Foundation for the Graduate in Jilin University, No. 2017176