超高效液相色谱-串联质谱法测定辅助生殖用培养液中谷氨酰胺的含量

Ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry determination of glutamine in human assisted reproductive medium

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摘要背景:应用高效液相色谱-串联质谱法检测生物样本中氨基酸含量具有样品处理简单、分析时间短、高选择性、高灵敏度等优势, 但目前该方法主要用于脑透析液、尿液及血清中谷氨酰胺含量的测试.目的:采用超高效液相色谱-串联质谱法测定辅助生殖用培养液中的谷氨酰胺含量.方法:采用超高效液相色谱-串联质谱仪, 色谱柱为SUPELCO Discovery HS F5-3 (15 cm×2.1 mm, 3μm), 柱温40℃, 以0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液为流动相, 梯度洗脱, 流速0.35mL/min;电喷雾离子化源负离子模式扫描, 采用多反应监测模式检测谷氨酰胺含量.结果与结论:谷氨酰胺在0.123 7-24.74 mg/L范围内线性关系良好 (r=0.999 7), 平均回收率为102.9％-108.2％, 相对标准偏差RSD为2.3％-4.9％, 谷氨酰胺定量限为9.76μg/L.将受精培养液 (含谷氨酰胺) 在37℃下放置24, 96h的谷氨酰胺含量较原液分别下降了6％和15％.结果说明采用高效液相色谱-串联质谱法检测辅助生殖用培养液中的谷氨酰胺含量, 操作简单, 不需要对样品进行衍生化处理, 方法专属性、准确性及灵敏度良好, 且测试时间短, 可用于辅助生殖用培养液的质量控制, 研究添加成分谷氨酰胺的降解而产生的临床风险.