提取人骨髓间充质干细胞的新方法与传统方法比较

A new method for extracting human bone marrow mesenchymal stem cells and the comparison with traditional methods

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摘要背景:提取人骨髓间充质干细胞主要有全骨髓贴壁培养法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选及免疫磁珠分选等方法.流式分选及磁珠分选等方法对设备及试剂要求高,应用局限.全骨髓贴壁培养法及密度梯度离心法较为常用,但仍有全骨髓贴壁法细胞长出速度较慢、密度梯度离心法所需离心时间较长等不足.若发现一种更简便、且能够短时间提取骨髓间充质干细胞的方法则可进一步提高实验效率.目的:介绍一种新的提取人骨髓间充质干细胞的方法,并与传统方法进行比较,证明新方法的可行性及实用性.方法:将磷酸缓冲盐溶液与人骨髓组织等比例混匀后离心使骨髓组织分层,取白膜层提取人骨髓间充质干细胞,与全骨髓贴壁法提取的人骨髓间充质干细胞进行对比.采用流式细胞分析及诱导多向分化实验进行鉴定.通过细胞计数、结晶紫染色、细胞骨架染色、划痕实验、Transwell迁移实验、RT-PCR等方法,分析两组细胞的原代细胞数目、传代后细胞形态、大小、细胞骨架、表面标志物表达、多向分化潜能、集落形成、增殖、迁移及成骨分化能力.结果与结论:①离心后磷酸缓冲盐溶液能够使人骨髓分层,并能够提取出人骨髓间充质干细胞;磷酸缓冲盐溶液法所提取的原代细胞数目较全骨髓贴壁法多,培养体系中漂浮脂肪组织少,原代细胞长出速度更快;②两种方法所提取细胞均呈梭形,表达标志物CD90、CD105、CD73,不表达CD45、CD34、CD11b、CD19及HLA-DR,具有多向分化潜能,符合间充质干细胞标准;③两种方法所提取细胞在形态、大小、细胞骨架方面没有显著差异,均能形成集落,且具有迁移能力,诱导成骨分化后两组细胞均表达成骨细胞标志物;④结果表明,在特定条件下利用磷酸缓冲盐溶液提取人骨髓间充质干细胞具有可行性及实用性.