改良法原代培养人脂肪间充质干细胞及其鉴定

Modified primary culture and identification of human adipose-derived mesenchymal stem cells

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摘要背景:采用常规酶消化法提取人脂肪间充质干细胞,由于消化的时间过长,导致获得的细胞活性变差,为满足组织工程对种子细胞数量的需求,该实验旨在寻找一种改良的人脂肪间充质干细胞培养方法.目的:胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取人脂肪间充质干细胞并进行相关生物学特性的鉴定.方法:将脂肪组织剪碎后分别应用胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法、常规胶原酶消化法进行培养;通过锥虫蓝拒染法计数细胞,比较不同方法获取细胞的产量、活力及增殖能力;利用流式细胞仪检测改良组细胞表面抗原CD105、CD73与CD44的表达;成骨或成脂诱导后,用碱性磷酸酶染色和油红O染色鉴定细胞分化能力.结果与结论:①胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取的细胞数量远多于常规酶消化法;②胶原酶Ⅰ消化联合组织块培养法获取的人脂肪间充质干细胞增殖能力强,细胞活力好,比常规酶消化法早1 d进入平台期,传代一次需5 d左右;③第3代改良组人脂肪间充质干细胞CD105、CD73与CD44表达均呈阳性,且纯度均达93％以上;④改良法获取的人脂肪间充质干细胞有良好的成骨与成脂分化能力;⑤结果表明,胶原酶Ⅰ消化法联合组织块培养法较常规酶消化法可获得数量多、活力好、增殖能力强的人脂肪间充质干细胞,且能够稳定传代,具有良好的分化能力,这满足了组织工程学的需求.