紫草素干预破骨细胞生成及破骨相关基因的表达

Shikonin intervenes with osteoclast formation and osteoclast-related gene expression

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摘要背景:破骨细胞的活化在牙周炎的发生发展中起重要作用,紫草素因其毒副作用较小并具有抗炎等优点,可将其应用于牙周炎基础治疗后的辅助药物治疗.目的:探讨紫草素对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的破骨细胞生成及破骨相关基因表达的影响.方法:采用CCK-8法检测不同浓度紫草素(0,0.0625,0.125,0.25,0.5,1,2μmol/L)对RAW264.7细胞的毒性,筛选出安全浓度;用不同质量浓度的核因子κB受体活化因子配体(0,30,50,100μg/L)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,经抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数目,筛选出最佳核因子κB受体活化因子配体质量浓度;给予核因子κB受体活化因子配体和不同浓度的紫草素干预后,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色和抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测其对破骨生成的影响;通过实时定量PCR技术检测破骨细胞标志性基因基质金属蛋白酶9、组织蛋白酶K、核因子κB受体活化因子、活化T细胞核因子和原癌基因c-Fos的mRNA表达.结果与结论:①高于0.5μmol/L的紫草素显著抑制RAW264.7细胞的生长(P<0.05);②50μg/L的核因子κB受体活化因子配体为最佳诱导浓度;③紫草素呈浓度依赖性的抑制体外破骨细胞生成(P<0.05);④紫草素呈浓度依赖性的抑制基质金属蛋白酶9、组织蛋白酶K、核因子κB受体活化因子、活化T细胞核因子和原癌基因c-Fos等参与破骨细胞分化的标志性基因表达(P<0.05);⑤结果表明,紫草素能够在体外呈浓度依赖性的通过抑制破骨相关基因的表达,进而抑制核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞的生成.