摘要背景:大面积骨软骨缺损修复效果差,双层或多层支架由于更加符合软骨解剖、更具仿生性,成为一种新的治疗策略.目的:探讨神经生长因子/Ⅱ型胶原蛋白-丝素蛋白-壳聚糖/Ⅰ型胶原蛋白-丝素蛋白-壳聚糖-纳米羟基磷灰石软骨及软骨下骨双层仿生支架修复软骨缺损的效果.方法:采用冷冻干燥、乳化-溶剂挥发法制备不同比例的Ⅱ型胶原蛋白-丝素蛋白-壳聚糖/Ⅰ型胶原蛋白-丝素蛋白-壳聚糖-纳米羟基磷灰石双层支架,检测支架的理化性能,筛选较适宜的各成分比例支架用于动物实验.将双层支架浸泡于神经生长因子缓释微球溶液中,制备载神经生长因子的双层支架.取30只新西兰大白兔,按照随机数字表法分为3组,每组10只,均建立骨软骨缺损模型,空白对照组不进行任何治疗,对照组植入未载神经生长因子的双层支架,实验组植入载神经生长因子的双层支架,术后4,8,12周,分别进行软骨修复大体观察、软骨组织形态观察.结果与结论:①通过孔隙率、吸水膨胀率、热水溶失率等指标的相关结果,得出:上层支架中Ⅱ型胶原蛋白∶丝素蛋白∶壳聚糖的质量比为1∶1∶1、下层支架中Ⅰ型胶原蛋白∶丝素蛋白∶壳聚糖∶纳米羟基磷灰石质量比为1∶1∶1∶1时,双层支架具有良好的理化性能,适宜用于动物实验.②神经生长因子缓释微球的平均粒径为(25.87±6.54)μm,载药量为0.516 μg/mg,包封率为40.5％.③动物实验中,大体观察结果显示,实验组软骨修复快于对照组、空白对照组,且修复效果最好.苏木精-伊红染色与阿利新蓝染色显示,至术后12周时,空白对照组缺损区可见纤维组织及少量软骨陷窝结构,对照组缺损区修复组织大部分为纤维软骨,软骨下骨未完全重建,骨软骨层分界不清晰,实验组软骨层与软骨下骨层修复比较完整、分界明显,可见潮线.免疫组化染色显示,至术后12周时,实验组修复软骨中的Ⅱ型胶原多于对照组、空白对照组.④实验成功制备出具有良好理化性质的软骨及软骨下骨双层仿生支架,该支架负载神经生长因子后能更好地促进兔软骨缺损修复.