摘要背景:近年来,腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)基因治疗已被证明是治疗骨关节炎的可靠和安全的方法.然而,鉴于骨关节炎发病机制的复杂性,单一基因操作治疗骨关节炎可能不能产生令人满意的效果.先前的研究表明,核转录因子κB可以促进骨关节炎软骨细胞中的炎症通路,而骨形态发生蛋白4可以促进软骨再生.目的:利用一种可以特异性靶向核转录因子κB的p65短发夹RNA(p65shRNA)与骨形态发生蛋白4一起治疗骨关节炎.方法:制备包含AAV-p65-shRNA和AAV-骨形态发生蛋白4的病毒颗粒,通过转染AAV-p65-shRNA或AAV-骨形态发生蛋白4进入细胞,评估其抑制软骨细胞炎症和促进软骨形成的效果,并进行体内和体外实验.实验按干预方式分为5组:PBS组、骨关节炎组、AAV-骨形态发生蛋白4组、AAV-p65shRNA组、骨形态发生蛋白4-p65shRNA 1∶1组,然后分别于术后4,12,24周采集标本.采集关节组织后进行番红O和阿利新蓝染色.通过免疫荧光染色检测关节腔内注射病毒颗粒对软骨修复的影响.进一步研究两种转染病毒颗粒的最佳比例,以提高混合细胞在体内的软骨形成潜能.结果与结论:AAV-p65shRNA和AAV-骨形态发生蛋白4联合应用对软骨再生和骨关节炎治疗有协同作用.以1∶1的比例转染AAV-p65shRNA和AAV-骨形态发生蛋白4的混合细胞产生最多的细胞外基质合成(P<0.05).体内实验结果也显示两种病毒的组合对骨关节炎软骨的再生潜力是所有组中最高的(P<0.05).上述结果证实,当两种病毒的比例相同时,联合疗法的效果最佳.减少p65shRNA 或骨形态发生蛋白4 转染细胞会导致胶原蛋白Ⅱ合成减少.p65shRNA抑制炎症和骨形态发生蛋白4促进再生对治疗骨关节炎同样重要.实验结果为同时抑制软骨炎症和促进软骨修复治疗早期骨关节炎提供了一种新策略.