摘要背景:国医大师韦贵康所创痛安汤治疗膝骨关节炎的疗效显著,但作用机制尚不明确.目的:探讨痛安汤通过调控大鼠滑膜巨噬细胞极化治疗膝骨关节炎的作用机制.方法:①通过miRNA高通量测序与PCR分析正常大鼠与膝骨关节炎大鼠膝关节滑膜组织中差异miRNA表达,通过数据库预测miR-27a靶基因,采用荧光素酶实验检测miR-27a与靶基因结合情况.②采用随机数字表法将68只SD大鼠随机分为正常对照组(n=16)、模型组(n=16)、miR-27a过表达组(n=12)、痛安汤组(n=12)、痛安汤+miR-27a抑制组(n=12).除正常对照组外,其他4组通过膝关节腔注射碘乙酸钠的方法建立右侧膝骨关节炎模型,造模后第2天,miR-27a过表达组、痛安汤+miR-27a抑制组右侧膝关节腔内分别注射miR-27a模拟物、miR-27a抑制物,1次/d,连续注射5 d;造模后第15天,痛安汤组、痛安汤+miR-27a抑制组给予痛安汤灌胃,其他3组给予生理盐水灌胃,1次/d,连续14d.灌胃干预结束后,分别进行行为学检测、X射线片检查、膝关节滑膜组织与软骨组织苏木精-伊红染色以及膝关节滑膜组织的免疫荧光染色、RT-PCR、Western blot检测.结果与结论:①miRNA高通量测序显示膝骨关节炎大鼠滑膜组织中miR-27a低表达,miR-27a的靶基因为核因子κB,荧光素酶实验显示二者能够相互结合.②行为学检测显示,miR-27a过表达或痛安汤可缓解膝骨关节炎大鼠的关节功能障碍,miR-27a抑制可拮抗痛安汤的作用.X射线片与苏木精-伊红染色结果显示,miR-27a过表达或痛安汤可减轻膝骨关节炎程度,miR-27a抑制削弱了痛安汤的治疗作用.RT-PCR与Western blot检测结果显示,与正常对照组比较,模型组白细胞介素10表达均降低(P＜0.05),基质金属蛋白酶13、白细胞介素1β、核因子KB表达均升高(P＜0.05);miR-27a过表达或痛安汤可不同程度地逆转膝骨关节炎造模导致的上述指标变化,而miR-27a抑制会削弱痛安汤的作用.免疫荧光染色结果显示,模型组CD86蛋白表达高于正常对照组(P＜0.05),CD206蛋白表达低于正常对照组(P＜0.05);miR-27a过表达组、痛安汤组CD86蛋白表达低于模型组(P＜0.05),CD206蛋白表达高于模型组(P＜0.05);痛安汤+miR-27a抑制组CD86高于痛安汤组(P＜0.05),CD206蛋白表达低于痛安汤组(P＜0.05).③结果表明,痛安汤通过促进miR-27a表达、抑制核因子κB表达来调控巨噬细胞极化,改善膝关节功能,进一步治疗膝骨关节炎.