摘要背景:卵巢组织玻璃化冻存是保存生育力的重要方法之一.丹参酮ⅡA具有多种药理活性,包括抗氧化、抑制炎症反应、减少凋亡等,但其作为卵巢组织玻璃化冷冻保护添加剂的作用尚不清楚.目的:探讨丹参酮ⅡA对小鼠卵巢组织冷冻保存的保护作用.方法:获取25只6周龄雌性KM小鼠的卵巢组织,随机分为5组,每组10个卵巢:新鲜组不进行冷冻保存,冷冻对照组使用玻璃化冷冻保护剂,0.5,2.5,5μmol/L丹参酮ⅡA组分别使用含0.5,2.5,5 μmol/L丹参酮ⅡA的玻璃化冷冻保护剂,置于液氮中冷冻保存.保存3 d后取出冻存管解冻,采用苏木精-伊红染色观察各组卵巢组织及卵泡形态,分析卵泡形态正常率及存活率;通过酶联免疫法检测卵巢内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、丙二醛、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及白细胞介素17水平;采用RT-qPCR和Western blot检测小鼠卵巢内核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid derived 2-like 2,Nrf2)和血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA及蛋白表达.结果与结论:①与新鲜组比较,冷冻对照组卵巢内各级卵泡形态异常、卵泡存活率下降(P<0.05),超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性下降(P<0.05),丙二醛、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及白细胞介素17水平均升高(P<0.05),Nrf2、HO-1的mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05);②与冷冻对照组比较,不同浓度丹参酮ⅡA均可改善卵巢内各级卵泡形态、提升卵泡存活率,提升超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性,降低丙二醛、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及白细胞介素17水平,提升Nrf2、HO-1的mRNA及蛋白表达,并且呈现浓度依赖性,以5 pmol/L丹参酮ⅡA的作用最显著;③结果表明,丹参酮ⅡA可能通过介导Nrf2/HO-1信号通路降低小鼠卵巢组织的氧化应激水平和炎症反应,减轻小鼠卵巢玻璃化冷冻保存而出现的生殖损伤.
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