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川续断皂苷Ⅵ促进低氧环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化

Asperosaponin Ⅵ promotes osteogenic differentiation of MC3T3-E1 cells under hypoxia environment

摘要背景:川续断皂苷Ⅵ具有良好的促成骨作用,但其在低氧环境下促进细胞成骨的作用尚不明确.目的:探讨川续断皂苷Ⅵ在低氧环境下对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及作用机制.方法:将MC3T3-E1细胞分为3组,对照组细胞在常氧条件下(体积分数21%O2)用完全培养基培养,低氧组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O2)用完全培养基培养,川续断皂苷Ⅵ组细胞在低氧条件下(体积分数0.5%O2)用含有川续断皂苷Ⅵ的完全培养基培养.24 h后,采用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖活性,TUNEL染色法和Western blot实验检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧水平和细胞周期分布.另外,各组细胞在低氧条件下分别用含1×10-5,1×10-6,1×10-7 mol/L川续断皂苷Ⅵ的成骨诱导液培养7 d,通过光学显微镜观察和碱性磷酸酶染色筛选川续断皂苷Ⅵ最适浓度,采用Western blot方法检测骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、PI3K/AKT信号轴相关蛋白表达.结果与结论:①与对照组相比,低氧条件下MC3T3-E1细胞增殖能力下降,1×10-6 mol/L川续断皂苷Ⅵ可以显著提高低氧状态下细胞增殖能力,并且减少细胞凋亡;②与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组细胞内活性氧减少,进入S期细胞比例明显增多;③与低氧组相比,1×10-6mol/L川续断皂苷Ⅵ组细胞形态舒展,较多突起,碱性磷酸酶染色较深;④与低氧组相比,川续断皂苷Ⅵ组骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白表达增加,p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低.结果表明,低氧环境下川续断皂苷Ⅵ可能通过调节PI3K/AKT通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化.

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