IRF9基因在脊髓损伤后神经保护中的调控作用:生信分析与实验验证
Neuroprotective regulation of the IRF9 gene after spinal cord injury:bioinformatics analysis combined with experimental validation
摘要背景:脊髓损伤后炎症的具体调控机制尚不清楚.研究表明干扰素调节因子9(IRF9)在多种炎症相关疾病中发挥关键作用,但IRF9在脊髓损伤中的具体作用尚未被系统性研究.目的:结合生信分析与体外实验系统探讨IRF9在脊髓损伤后炎症反应中的作用及其潜在的分子机制.方法:①通过整合GEO数据库的基因芯片数据,采用差异基因分析、GO和KEGG功能富集分析、基因集富集分析及蛋白互作网络分析探讨脊髓损伤后差异基因的功能及通路,筛选与炎症相关的关键基因.②将第3代PC12细胞分4组培养:空白对照组不进行任何处理,损伤对照组加入脂多糖干预24 h,IRF9过表达组转染IRF9过表达慢病毒72 h后加入脂多糖干预24 h,IRF9敲低组转染IRF9敲低表达慢病毒72 h后加入脂多糖干预24 h.脂多糖干预结束后,CCK-8法检测细胞增殖,Elisa检测细胞培养基中脑源性神经生长因子和神经营养因子3水平,Western blot检测细胞内Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达,划痕实验检测细胞迁移能力.结果与结论:①生物信息学分析显示,脊髓损伤后显著激活了炎症和免疫相关通路,筛选出IRF9为潜在核心调控因子,IRF9高表达可能上调Toll样受体和核因子κB信号通路,同时抑制环磷酸腺苷和钙信号通路及谷氨酸能突触功能,参与炎症反应和神经功能障碍的调控;②细胞实验结果显示,与空白对照组比较,损伤对照组细胞增殖、迁移能力及Bcl-2蛋白表达降低,脑源性神经生长因子和神经营养因子3水平降低,Bax与Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高;与损伤对照组比较,IRF9敲低组细胞增殖、迁移能力及Bcl-2蛋白表达升高,脑源性神经生长因子和神经营养因子3水平升高,Bax与Cleaved-Caspase-3蛋白表达降低;③结果表明,IRF9可能是脊髓损伤后继发性损伤的重要调控因子和潜在治疗靶点.
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