还原型氧化石墨烯提高脂肪干细胞内皮向分化效率及血管形成能力
Reduced graphene oxide improves endothelial differentiation efficiency and angiogenesis ability of adipose-derived stem cells
摘要背景:脂肪干细胞能够在特定的诱导环境下分化为血管内皮细胞,是组织工程血管化过程中较为理想的种子细胞.然而脂肪干细胞的内皮向分化效率低,严重限制了该方法的应用.目的:探讨还原型氧化石墨烯对脂肪干细胞内皮向分化效率和血管形成能力的影响.方法:首先,采用绿色合成工艺制备还原型氧化石墨烯,使用透射电镜、能谱分析和傅里叶变换红外光谱等手段对还原型氧化石墨烯进行材料表征.然后将不同质量浓度的还原型氧化石墨烯与脂肪干细胞共培养,通过CCK-8实验确定还原型氧化石墨烯的安全浓度范围,接着利用安全浓度范围内的还原型氧化石墨烯诱导脂肪干细胞内皮向分化,通过RT-qPCR和Western blot检测脂肪干细胞内皮向分化相关指标的表达.最后,通过划痕实验和小管形成实验评估还原型氧化石墨烯诱导分化后细胞的成管和迁移能力.结果与结论:①还原型氧化石墨烯具有典型的二维片状结构,主要含碳、氧元素,可检测到与含氧官能团相关的特征吸收峰;②CCK-8实验结果显示,10 μg/mL及以下浓度的还原型氧化石墨烯培养72 h对脂肪干细胞的活力无影响;③RT-qPCR和Western blot结果显示,10 μg/mL及以下浓度的还原型氧化石墨烯诱导6,9 d均可以显著提高脂肪干细胞内皮向分化相关标志物的表达,其中5 μg/mL还原型氧化石墨烯诱导9 d,内皮向分化标志物基因表达差异最大;④划痕实验和小管形成实验结果表明,相较于空白组和对照组,还原型氧化石墨烯组细胞的迁移和成管能力显著增强;⑤结果表明,绿色合成的还原型氧化石墨烯可以显著提高脂肪干细胞的内皮向分化效率,其中5 μg/mL还原型氧化石墨烯诱导9 d是最佳的时间浓度组合,诱导分化后的细胞具有更好的血管形成功能.
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