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负载碱性成纤维细胞生长因子复合性生物支架对牙髓干细胞成血管性能的影响

Effects of basic fibroblast growth factor-loaded composite bioscaffold on angiogenesis of dental pulp stem cells

摘要背景:前期研究证明,一定比例的甲基丙烯酸酐改性明胶(gelatin-methacryloyl,GelMA)与经处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)复合生物支架具有良好的生物学性能,有利于细胞的增殖与黏附.负载碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的复合性生物支架为牙髓再血管化提供了新思路.目的:观察负载bFGF的GelMA/TDM复合生物支架对人牙髓干细胞增殖、迁移及成血管性能的影响.方法:制备负载0,50,100,200,500 ng/mL bFGF的GelMA/TDM复合支架,通过CCK-8检测牙髓干细胞增殖能力并筛选bFGF的最佳质量浓度,然后将牙髓干细胞分3组处理,分别为GelMA/TDM组、bFGF-GelMA/TDM组、空白对照组.划痕实验检测牙髓干细胞的迁移能力,Matrigel小管形成实验检测牙髓干细胞成管分支点数量,免疫荧光染色检测牙髓干细胞中血管内皮生长因子蛋白的表达,qPCR检测牙髓干细胞中成血管相关基因(血管内皮生长因子、转化生长因子β、肝配蛋白B2)的表达.结果与结论:①CCK-8检测结果显示培养3,5 d时,负载bFGF的GelMA/TDM复合支架均可促进牙髓干细胞的增殖,其中bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架的促增殖作用最明显;②细胞划痕实验显示bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组细胞迁移面积明显大于GelMA/TDM组和空白对照组;③Matrigel小管形成实验显示,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组成管分支点数量大于GelMA/TDM组和空白对照组;④免疫荧光实验显示,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组血管内皮生长因子阳性平均吸光度值高于GelMA/TDM组和空白对照组;⑤qPCR实验显示,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架组成血管相关基因血管内皮生长因子、转化生长因子β、肝配蛋白B2的表达高于GelMA/TDM组和空白对照组.结果表明,bFGF(100 ng/mL)-GelMA/TDM复合支架表现出较好的促牙髓干细胞增殖、迁移和成血管分化能力.

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