摘要背景:间充质基质细胞的T细胞免疫抑制作用为自身免疫性疾病的治疗带来新的希望,人脐带间充质基质细胞治疗药物艾米迈托赛注射液已被批准用于治疗14岁以上以消化道受累为主的激素治疗失败的急性移植物抗宿主病.因此,进一步探索间充质基质细胞的T细胞免疫抑制潜力能够为自身免疫性疾病治疗奠定基础.目的:细胞程序性死亡配体1基因过表达对人脐带间充质基质细胞抑制CD4+T细胞增殖的影响.方法:①人脐带间充质基质细胞体外培养至第0,1,2,3代,流式细胞仪检测细胞程序性死亡配体1阳性细胞比率;②将人脐带间充质基质细胞分为实验组和阴性对照组,实验组采用慢病毒介导细胞程序性死亡配体1基因修饰人脐带间充质基质细胞,阴性对照组为转染空白质粒载体慢病毒的人脐带间充质基质细胞,流式细胞术、实时荧光定量PCR和Western blot检测转染效率;③从健康人外周血中磁珠富集CD4+T细胞,经羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记后以5∶1的比例与实验组和阴性对照组人脐带间充质基质细胞共培养,通过流式细胞术检测羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯衰减的CD4+T细胞比例;④对实验组和阴性对照组人脐带间充质基质细胞进行RNA测序,同时对实验组人脐带间充质基质细胞进行单细胞RNA测序,并根据功能进行亚群分组,通过生物信息学分析方法描绘各个亚群标志基因热图、富集的信号通路和基因调控网络.结果与结论:①随着传代次数的增加,人脐带间充质基质细胞中细胞程序性死亡配体1阳性细胞百分比逐渐减少;②成功构建稳定过表达细胞程序性死亡配体1的人脐带间充质基质细胞,实验组细胞程序性死亡配体1的表达量显著增加;③转录组测序数据提示过表达细胞程序性死亡配体1的人脐带间充质基质细胞能够促进免疫效应调控通路相关基因表达上调;④通过将CD4+T细胞与人脐带间充质基质细胞共培养,结果显示实验组CD4+T细胞比例明显下调;⑤基于单细胞RNA测序结果,过表达细胞程序性死亡配体1的人脐带间充质基质细胞可分为3个功能亚群,具有异质性;细胞程序性死亡配体1基因水平在1亚群表达更高,且组蛋白甲基转移酶SETDB1显著高表达可能与T细胞免疫抑制功能增强密切相关.上述结果表明:细胞程序性死亡配体1基因过表达可以显著增强人脐带间充质基质细胞的T细胞免疫抑制能力.通过单细胞RNA测序可较好地根据细胞程序性死亡配体1基因修饰人脐带间充质基质细胞的功能特性进行分群,为提高人脐带间充质基质细胞的临床疗效提供理论支持.