摘要背景:细胞移植是修复脊髓损伤的有效方式之一,课题组研究发现移植的触液神经元可以存活,促进小鼠脊髓损伤后运动功能改善.但是,移植的触液神经元在体内是否分化为有功能的神经元,从而促进脊髓损伤运动功能恢复尚不清楚.目的:探究触液神经元体内移植后是否分化为有功能的神经元促进脊髓损伤运动功能恢复.方法:从出生24 h内的C57BL/6乳鼠颈髓中分离含有触液神经元的原代细胞进行贴壁培养,使用融合多模态成像基因的慢病毒转染细胞,并通过嘌呤霉素筛选和纯化触液神经元,用含血清分化培养基诱导触液神经元分化,通过免疫荧光检测触液神经元分化后神经元标记物NeuN和运动神经元标记物ChAT的表达.将30只C57BL/6小鼠随机分为3组,移植组及PBS组通过钳夹法建立T10节段脊髓损伤模型,假手术组仅打开椎板;脊髓损伤后1周,移植组原位移植触液神经元,PBS组注入等量PBS.在移植后第1,4,8周,免疫荧光检测脊髓组织运动神经元标记物ChAT的表达;移植后第8周免疫荧光检测突触标记物SYN、抑制性递质标记物GAD65/67和兴奋性递质标记物vGLUT1的表达,苏木精-伊红染色观察脊髓组织形态,BMS运动功能评分、足迹分析评估小鼠运动功能恢复情况.结果与结论:①触液神经元体外表达神经干细胞特性,可分化为运动神经元;②移植触液神经元可以在小鼠体内长期存活、分化为运动神经元;③触液神经元分化为运动神经元的比例在第8周最高(P<0.000 1);④移植后8周,触液神经元与突触标记物SYN、抑制性递质标记物GAD65/67、兴奋性递质标记物vGLUT1荧光共表达,说明移植触液神经元与宿主神经元形成突触联系;⑤PBS组小鼠的BMS评分始终低于移植组(P<0.001),移植组小鼠足迹较为协调,仅有足趾拖拽,PBS组小鼠存在明显的下肢拖拽;⑥苏木精-伊红染色显示PBS组小鼠损伤区域形成大片空洞,移植组小鼠损伤区域空洞减小.以上结果表明,移植触液神经元在体外及体内均可分化为运动神经元,并形成突触连接,从而改善脊髓损伤小鼠的运动功能.