载红景天苷三明治纳米纤维膜调控巨噬细胞极化促进糖尿病创面血管生成
Sandwich-like nanofiber membrane loaded with salidroside regulates macrophage polarization and promotes angiogenesis in diabetic wounds
摘要背景:红景天苷由于抗炎、抗氧化和促血管生成的特性在多种疾病的治疗中显示出潜力,但在糖尿病创面愈合方面的应用仍有待进一步探索.目的:探索含红景天苷的3层纳米纤维膜修复糖尿病皮肤创面的效果.方法:①分别制备聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇静电纺丝膜与聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜,表征膜的形貌、水接触角、拉伸弹性模量及药物缓释特性.将两种膜分别与人脐静脉内皮细胞共培养,通过细胞黏附与活死染色分析膜的生物相容性.②使用1 μg/mL脂多糖干预对数期的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系(RAW264.7),24 h后收集细胞上清液,与含体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基混合后作为条件培养基.将人脐静脉内皮细胞分3组培养:对照组不加入任何材料,其余两组分别与聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇静电纺丝膜与聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜共培养,同时加入条件培养基诱导炎症反应,检测细胞增殖、迁移与成管能力.③使用1 μg/mL脂多糖(诱导炎症反应)干预RAW264.7细胞24 h后分3组培养,对照组不加入任何材料,其余两组分别与聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇膜与聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇膜共培养,检测细胞内一氧化氮水平与CD206、白细胞介素1β mRNA表达.④取C57小鼠24只,利用高脂高糖喂养+腹腔注射链脲佐菌素的方式建立糖尿病模型,造模3周后在小鼠背部制作1个直径8 mm的圆形全层皮肤缺损,随机分3组干预:空白组(n=8)不植入任何材料,对照组(n=8)、实验组(n=8)分别植入聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇静电纺丝膜或聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜,观察创面愈合情况,并于设定时间点进行创面皮肤组织苏木精-伊红、Masson染色与CD206、血管内皮生长因子免疫组化染色.结果与结论:①扫描电镜下可见聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜呈3层结构,各层纤维呈随机排列,相互连接,构成多孔结构.聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜的水接触角小于聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇静电纺丝膜(P<0.05),两组膜的拉伸弹性模量相比无明显差异.聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜具有良好的药物释放性能.两组膜材料均具有优异的生物相容性,能够有效支持细胞的生长与存活.②在炎症反应下,相较于对照组、聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇静电纺丝膜,聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移与成管能力.③在炎症反应下,相较于对照组、聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇膜,聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜可降低细胞内一氧化氮水平、白细胞介素1β mRNA表达,提升CD206 mRNA表达,表明聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜能够有效地促进巨噬细胞向M2表型极化,发挥抗炎作用.④动物实验显示,相较于对照组、聚己内酯-聚乙二醇-聚乙烯醇静电纺丝膜,聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜可促进糖尿病创面的愈合;苏木精-伊红和Masson染色显示,实验组皮肤样本中新生血管生成更为显著,胶原纤维完全成熟.免疫组化染色结果表明,聚己内酯-聚乙二醇/红景天苷-聚乙烯醇静电纺丝膜通过上调CD206和血管内皮生长因子的表达显著促进巨噬细胞向M2型极化和血管生成.
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