摘要背景:针对感染性皮肤创面,临床上常使用药物比如聚维酮碘乳膏和夫西地酸乳膏以控制感染为主,但忽略了创面微环境如炎症的调节,因此,需要开发一种有效抗菌并能调节炎症以促进皮肤愈合的生物材料.目的:探讨万古霉素-猪皮脱细胞外基质水凝胶的抗菌、抗炎性能以及治疗皮肤感染性创面的效果.方法:①制备含 0,1,2,4 mg/mL 万古霉素的猪皮脱细胞外基质水凝胶,分别记为PAEH、VA-PAEH1、VA-PAEH2、VA-PAEH4,检测各组水凝胶的药物包封率与药物释放性能.将小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3分别与4组水凝胶非接触共培养,通过活死染色检测水凝胶的细胞毒性;将小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3分别与4组水凝胶浸提液共培养,通过 CCK-8法检测细胞活力.将4组水凝胶分别与大鼠红细胞悬液共培养,检测溶血率.将耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分别与4 组水凝胶共培养,检测水凝胶的抗菌性能.综合上述实验结果,筛选出性能优异的 VA-PAEH1水凝胶进行后续实验.表征 VA-PAEH1水凝胶的微观形貌、溶胀性能、降解性能与流变学特性.②将PAEH 水凝胶、VA-PAEH1水凝胶、壳聚糖水凝胶分别与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(或大肠杆菌)共培养,通过琼脂平板涂布实验、抑菌圈实验、扫描电镜观察评估水凝胶的抗菌性能.将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分5组培养:空白组不进行任何处理,对照组加入脂多糖诱导炎症反应,其余3组加入脂多糖24 h后分别加入PAEH水凝胶、壳聚糖水凝胶和VA-PAEH1水凝胶,继续培养24 h后进行CD86(M1型巨噬细胞标记物)、CD206(M2 型巨噬细胞标记物)免疫荧光染色.将 PAEH 水凝胶、壳聚糖水凝胶和 VA-PAEH1 水凝胶分别与小鼠胚胎成纤维细胞 NIH-3T3 非接触共培养,通过EdU 染色检测细胞增殖,划痕实验和Transwell 实验检测细胞迁移.③在28只 SD 大鼠背部制作1个直径12 mm 全层皮肤缺损创面,随后滴加耐甲氧西林金黄色葡萄球菌液模拟感染,随机分 4 组干预:对照组(n=7)创面注射生理盐水,PAEH 组(n=7)、壳聚糖水凝胶组(n=7)和 VA-PAEH1组(n=7)创面注射对应的水凝胶,观察创面愈合情况.术后3 d 取材,进行髓过氧化物酶和CD206免疫组化染色;术后14 d 取材,进行苏木精-伊红与Masson 染色.结果与结论:①VA-PAEH1、VA-PAEH2和VA-PAEH4水凝胶的药物包封率分别为98.34%,98.15%和97.68%,3种水凝胶均具有良好的药物缓释效果,但VA-PAEH2和VA-PAEH4水凝胶药物累计释放量可能存在安全隐患.CCK-8检测与活死染色显示PAEH、VA-PAEH1水凝胶无明显的细胞毒性,具有良好的细胞相容性.溶血实验显示PAEH、VA-PAEH1水凝胶的溶血率在安全范围内,具有良好的血液相容性.VA-PAEH1、VA-PAEH2、VA-PAEH4均具有良好的抗菌性能.VA-PAEH1水凝胶由互相交织的纤维组成,具有良好的溶胀性能、降解性能与流变学特征.②琼脂平板涂布实验、抑菌圈实验、扫描电镜观察结果显示,相较于PAEH水凝胶、壳聚糖水凝胶,VA-PAEH1水凝胶可有效抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌与大肠杆菌的生长繁殖.与壳聚糖水凝胶相比,PAEH、VA-PAEH1水凝胶可促进巨噬细胞从M1型向M2型转化,具有良好的抗炎能力.与壳聚糖水凝胶相比,PAEH、VA-PAEH1水凝胶可促进NIH-3T3细胞增殖与迁移.③与其他3组比较,VA-PAEH1组创面愈合最快.苏木精-伊红与Masson染色显示VA-PAEH1组创面炎症细胞浸润较轻、胶原组织致密,创面愈合质量最高.髓过氧化物酶免疫组化染色显示,相较于PAEH水凝胶、壳聚糖水凝胶,VA-PAEH1水凝胶可明显减轻细菌引起的炎症细胞浸润;CD206免疫组化染色显示,相较于PAEH水凝胶、壳聚糖水凝胶,VA-PAEH1水凝胶可提升M2巨噬细胞比例,促进创面愈合.